6. Содержание производителей в инкубационном цехе и получение половых продуктов
Из преднерестовых прудов производителей пересаживают в бассейны преднерестового содержания. Облов и пересадку на всех этапах нерестовой кампании проводят с особой осторожностью, помня о том, что травмирование и излишнее стрессирование самок может привести к образованию тромбов в гонадах и неполной отдаче икры. При облове используют специальные сачки-рукава, полотнища из мешковины и носилки, обтянутые мешковиной или брезентом.
В первой половине мая для завершения созревания половых продуктов производителей перед инъекцией выдерживают в бассейнах при температуре 18-20 °С не менее четырех-пяти дней. При пересадке рыб из прудов в бассейны разница температур воды не должна превышать 3 °С. В одном бассейне содержат 6-8 самок массой 5-8 кг или 12 самцов.
Во второй половине нерестового периода (конец мая - начало июня) производителей инъецируют без предварительного выдерживания, так как в это время температура воды в прудах обычно поднимается до 19-22 °С и у самок всех возрастных групп процесс созревания ооцитов завершается [5].
До и после гипофизарной инъекции самок карпа содержат в контейнерах (садках), изготовленных по размеру рыб из проволоки толщиной около 7 мм, обтянутых безузелковой делью с ячеей 5-7 мм. Контейнеры устанавливают в бассейнах или лотках с подогретой проточной водой. Самцов чаще всего содержат группами непосредственно в бассейнах или лотках. Плотность посадки рыб не должна превышать 30 кг на 1 м3 воды в бассейне. Расход воды составляет 2-3 л/с на 100 кг массы рыб. В период содержания рыб в контейнерах необходимо контролировать концентрацию растворенного в воде кислорода. Она должна быть не менее 6 мг/л.
Выше была указана примерная продолжительность созревания самок после разрешающей инъекции. У созревшей самки при легком надавливании на брюшко начинают выделяться отдельные икринки. У некоторых самок может начаться преждевременное выметание икры. Сначала самки выделяют небольшие порции икры. Окончательное их созревание после этого наступает через 0,5-1 ч.
Обычно самок проверяют за 2 ч до расчетного времени. При начавшейся овуляции у самок на стенках бассейнов или садков обнаруживают приклеенные икринки. Характерным признаком появления текучих самок является также наличие пены у слива воды из бассейна.
Время получения икры оказывает существенное влияние на ее качество. Преждевременно взятая икра отличается мутно-желтым оттенком и вязкой консистенцией. Нормально созревшая икра, при легком надавливании на брюшко самки и при продвижении руки от грудной части к хвосту, вытекает из генитального отверстия непрерывной струей. При отцеживании перезревшей икры выделяется много овариальной жидкости. Незрелая и перезрелая икра имеет пониженную оплодотворяемость. Молодь, полученная из такой икры, характеризуется пониженной жизнеспособностью.
На качество половых продуктов, помимо времени отцеживания, влияет ряд других факторов. Впервые нерестящиеся самки, по сравнению с повторно нерестящимися, отличаются примерно вдвое меньшей плодовитостью и выделяют более мелкую икру. В потомстве таких самок, как правило, наблюдается повышенная гибель эмбрионов и большое число уродств. У очень молодых самцов сперма может иметь низкую оплодотворяющую способность. По этой причине не следует использовать для воспроизводства впервые созревающих производителей, особенно самок.
Масса икринок карпа должна быть не менее 1,2 мг. У крупных, хорошо упитанных самок она может достигать 1,4-1,5 мг. Качество икры и спермы в значительной степени зависит от условий содержания производителей. После плохого нагула самки имеют мелкую икру с ограниченным запасом питательных веществ. На качество икры отрицательно влияет затянувшаяся зимовка, а также недостаточное питание самок в преднерестовый период. Причиной снижения качества половых продуктов могут быть и неблагоприятные условия в период выдерживания производителей в цехе до и после гипофизарной инъекции: резкие температурные скачки, напряженный кислородный режим и т.п. Качество икры и спермы может снижаться и после их получения, например, вследствие длительного передерживания.
При получении половых продуктов нужно следить, чтобы в икру или сперму не попала вода. Попадание воды приводит к преждевременной активации половых клеток, в результате чего они в дальнейшем теряют способность к оплодотворению [7].
Количество спермы, получаемой за одно отцеживание у отдельных особей, может сильно различаться. В среднем самцы продуцируют 1,2-2 см3 спермы. Гипофизарная инъекция увеличивает объем спермы до 12-15 см3.
Качество спермы определяют, просматривая её под микроскопом. На предметное стекло помещают небольшую каплю молок, а рядом с ней - большую каплю воды. Наблюдая в микроскоп при малом увеличении, соединяют каплю воды с молоками, используя для этого препаровальную иглу. Попав в воду, сперматозоиды становятся подвижными и быстро распространяются в капле воды. В зависимости от характера движения спермиев сперму относят к одному из 5 классов [14]:
- 5 класс - все спермии подвижны и движение их поступательное;
- 4 класс - все спермии подвижны, но небольшая часть их совершает колебательные движения;
- 3 класс - все спермии подвижны, но большая часть их совершает колебательные движения;
- 2 класс - основная часть спермиев подвижна, но движение их преимущественно колебательное;
- 1 класс - большая часть спермиев неподвижна.
Сперма, в которой поступательное движение наблюдается только у небольшой части сперматозоидов, а основная масса их совершает только колебательные движения или остается неподвижной, непригодна для оплодотворения. Такая сперма обычно имеет жидкий водянистый вид снятого молока. Сперма хорошего качества, отнесенная к 4 и 5 классу, по внешнему виду и консистенции напоминает сливки [9]. Самцов со спермой хорошего качества можно использовать вторично через 10 суток.
Сперму у самцов лучше отцеживать на 0,5-1 ч раньше предполагаемого времени получения икры. От каждого самца сперму сцеживают в отдельный стеклянный бюкс или пробирку. Их закрывают марлевыми тампонами и хранят в холодильнике или термосе при температуре около 4-6 °С. При такой температуре сперма практически не теряет свою активность в течение нескольких часов.
Икру у самок отцеживают в тарированные полиэтиленовые тазики или мерные стаканы, взвешивают или определяют объем. Отцеженная икра не теряет способности к оплодотворению в течение 30-45 мин. Поэтому оплодотворение икры спермой удобнее производить, когда будет отобрана икра от 8-10 самок. Не следует передерживать икру более 1ч.
Для снижения трудоемкости работ и во избежание травматизма рыб при получении икры у самок целесообразно применять их анестезирование. При искусственном воспроизводстве пресноводных рыб широко применяются различные анестетики: MS-222, пропоксат, пропанидит, гидрохлорид хинальдина и хинальдин [12]. В нашей стране наиболее широко используют хинальдин. Он представляет собой маслянистую светло-желтую жидкость с характерным резким запахом, хорошо растворимую в органических растворителях. Препарат хранят в темной посуде. Для анестезрования используют водную эмульсию хинальдина, который предварительно растворяют в этиловом спирте, ацетоне или эфире в соотношении 1 мл препарата: 10 мл растворителя.
Этот раствор хинальдина в спирте смешивают с 1 л воды, получая, таким образом, концентрированную эмульсию анестетика. При анестезии рыб к 10 л воды добавляют 20-30 мл концентрированной эмульсии. Чем выше температура воды, тем меньше должна быть доза препарата. Для более точного определения концентрации препарата проводят пробное анестезирование 1-2 рыб. Нормальной считается дозировка, при которой рыбы засыпают через 3-5 мин и выходят из наркоза через 5-7 мин после помещения их в свежую воду. Хинальдин обладает мягким анестезирующим действием и даже при длительной экспозиции в течение нескольких часов не оказывает отрицательного влияния на рыб. Единственным его недостатком является неприятный запах, в связи, с чем некоторые рыбоводы предпочитают заменять хинальдин другими препаратами. Одним из таких препаратов является пропоксат - порошок, хорошо растворимый в воде и без запаха. В отличие от хинальдина, пропоксат обладает более жестким действием и поэтому требует точной дозировки. При температуре 22-25 °С доза пропоксата для производителей карпа не должна превышать 3 мг/л, при 15-20 °С она может быть увеличена до 4 мг/л. Раствор пропоксата готовят обычно непосредственно перед употреблением, растворяя препарат в прудовой воде [7].
Глубину наркоза рыб характеризуют по их поведению и разделяют на следующие пять стадий:
- стадия I - повышение подвижности с заметным учащением дыхания;
- стадия II - потеря равновесия, рыбы опрокидываются на бок;
- стадия III - потеря ориентировочного рефлекса, дыхание частое и нерегулярное;
- стадия IV - рыбы лежат на дне или в изогнутом положении у поверхности воды;
- стадия V - остановка дыхания, полная неподвижность рыб. При инъецировании и взятии икры необходима IV стадия наркоза [15].
Самок после появления у них признаков выметывания икры вылавливают делевым рукавом из емкости, помещают (3-4 особи) в глубокие носилки с анестезирующим раствором и, после их обездвиживания, отцеживают икру. После проведения необходимых операций рыбу помещают в бассейн с проточной водой. Для предупреждения асфиксии рыб и поддержания постоянной концентрации препарата анестезирующий раствор необходимо периодически обновлять.
Нарушение технологии заводского воспроизводства карпа может привести к закупорке яйцевода тромбами. Большие тромбы, представляющие собой выпячивания в овариальную полость тканей яичника, препятствуют выходу овулировавшей икры. Удалить такие тромбы и полностью отцедить икру у самок не удается.
Основной причиной тромбов является нарушение нормального созревания и овуляции яйцеклеток. Это нарушение может вызвать недостаточная подготовленностью самок к нересту, заниженная доза гипофизов, недостаточный интервал между предварительной и разрешающей инъекциями, применение однократной (особенно в начале сезона) инъекции. В конце нерестового сезона тромбы могут образовываться у перезревших самок. Например, икра инъецированных высокоплодовитых самок, перенесших к третьей декаде мая многократные повышения температуры воды до 20-25 °С, созревала, но овулировала не полностью и образовывала тромбы. Таких рыб рекомендуют использовать на естественном нересте [7, 13].
Появление тромбов может быть обусловлено также травматизмом рыб, резкими температурными колебаниями, неудовлетворительным кислородным режимом (особенно после гипофизарных инъекций) и другими стрессовыми факторами. Основная часть самок с обширными тромбами впоследствии, как правило, погибает, поэтому их следует выбраковывать.
После получения половых продуктов производителей выдерживают в течение 3-4 ч при повышенной (в 1,5-2 раза) проточности, в течение которых выравнивают температуру воды в бассейне до температуры воды в прудах, после чего рыб отправляют на нагул.