Стимуляция созревания пиленгаса с помощью гонадолиберинов и нейролептиков (Глубоков А.И. и Микодина Е.В., ВНИРО. Коуржил Я., Барт Т., Вахта Р., НИИРГ (Чехо-Словакия)) (УДК 639.3:597.593.4)

Пиленгас, являющийся объектом искусственного воспроизводства, обладает широким спектром эврибионтности и ценными вкусовыми качествами. Полноцикловым разведением пиленгаса занимаются преимущественно в нашей стране. Для получения половых продуктов используют гипофизы, гонадотропины, в последнее время - суперактивный аналог люлиберина - сурфагон. Продолжительность стимуляции составляет 3-7 сут, количество инъекций - 4-8. Однако не все ооциты овулируют.

Разработанные методики получения качественных половых продуктов кефалевых рыб обладают рядом недостатков: высокой стоимостью, отсутствием стандартной активности и нестерильностью препаратов, длительностью стимуляции, непредсказуемостью точного времени наступления овуляции, наличием самок с неполной овуляцией.

Цель наших исследований состояла в разработке более современной методики индукции нереста самок пиленгаса с устранением указанных выше недостатков.

Стимуляцию гаметогенеза самок пиленгаса на его завершающих этапах проводили в 1990 г. с 26 мая по 22 июня на базе маточного стада Бердянского отделения АзНИИРХа, сформированного из особей, акклиматизированных в Молочном лимане Азовского моря и достигших половой зрелости в садках, установленных в лимане. Для работы использовали 14 восьми- и четырехгодовиков (соответственно эксперименты № 1 и 2) и 9 пятигодовиков (эксперимент № 3). У четырехгодовиков длина от конца рыла до конца наиболее длинных лучей в хвостовом плавнике составляла 42-52 см, масса-1,10-2,10 кг; у пятигодовиков - 50-66 см, 1,60-2,45 кг; у восьмигодовиков -46-61 см, 1,47-3,27 кг.

Стимуляцию созревания четырехгодовиков осуществляли с 10 по 11 июня. Диаметр ооцитов к началу стимуляции у опытных и контрольных особей составлял 575-650 мкм. Стимуляцию созревания шестигодовиков проводили с 19 по 20 июня. Диаметр ооцитов также колебался в пределах 575-650 мкм. Созревание восьмигодовиков стимулировали с 28 по 29 мая. Диаметр ооцитов составлял 540-600 мкм.

Во время стимуляции самок содержали в садках, температура воды за период исследований колебалась в пределах 16,8 °С - 24,1 °С, соленость в среднем составляла 13 ‰, концентрация растворенного кислорода - 4,6-8,9 мг/л, рН - 7,8-8,3. Перед овуляцией самок переносили в инкубационный цех.

Стимуляцию созревания осуществляли с помощью двух аналогов гонадолиберинов: des Gly¹⁰ (D-Ala⁶)LHRH и des Gly¹⁰(D-Trp⁶)LHRH суммарной дозой 75 мкг/кг, гонадолиберины вводили внутримышечно в 2 инъекции с интервалом 24 ч в количестве соответственно ¹/₃ и ²/₃ суммарной дозы. Два нейролептика, обладающие антагонистическим сродством к рецепторам дофамина "Н - И" и сульпирида, дозой 1-8 мг/кг вводили внутрибрюшинно за одну инъекцию. Контролем служили интактные особи и особи, стимулированные гомогенатом ацетонированного гипофиза сазана. В ходе созревания вели цитоморфологический конроль за состоянием ооцитов, следили за состоянием генипоры и общим статусом самки. Пробы ооцитов отбирали in vivo специальным щупом, вводимым через генипору.

Полученную зрелую икру оплодотворяли полусухим способом спермой от 2-3 интактных или стимулированных гомогенатом гипофиза сазана самцов. Инкубацию оплодотворенной икры проводили в бассейнах объемом 0,2-15 м³.

Эксперимент № 1 был поставлен с целью выяснения оптимальных доз нейролептика "Н-И" для стимуляции созревания ооцитов пиленгаса на заключительных этапах. В результате комплексной стимуляции созревания нейролептиком (дозой 1; 2; 4 мг/кг) и гонадолиберином (D-Trp⁶ дозой 75 мкг/кг) произошло развитие процесса созревания ооцитов. Причем при максимальной исследованной дозе нейролептика "Н-И" у 2 из 4 самок начался процесс слияния жировых капель и у одной из них почти завершился. Однако дальнейшего созревания ооцитов не произошло. Это связано с резким падением температуры в ходе эксперимента (с 19,4° до 16,8 °С), ниже минимальной нерестовой для пиленгаса. Это привело к эндогенной гормональной блокаде процесса созревания. У самок пиленгаса, стимулированных гомогенатом гипофиза сазана, произошел лишь незначительный рост ооцитов (на 25-35 мкм).

Следующий эксперимент был поставлен, когда температура достигла оптимальных значений для размножения пиленгаса и продолжала устойчиво возрастать, однако после завершения стимуляции снизилась с 22,3° до 19,0 °С. В эксперименте № 2 преследовали те же цели, что и в эксперименте № 1. Различие в схеме заключалось в использовании во втором эксперименте другого гонадолиберина - сурфагона. При стимуляции созревания нейролептиком "Н-И" дозой 2 и 4 мг/кг овуляции отмечена у 100 % самок, дозой 1 мг/кг - 67 %. Относительная плодовитость составила 337,6-554,1 тыс. шт./кг. Овуляция наступила через 38-72 ч после начала стимуляции. При соблюдении технологических условий икра была оплодотворена на 40-72 %. После чего получена жизнеспособная молодь.

В ходе эксперимента № 2 самки, у которых еще не наступила овуляция, в течение 12 ч находились в воде с пониженным содержанием кислорода. У одной из них овуляции не наступило, у двух в результате перезревания (из-за отсутствия света в цехе) только 5 % икры было способно к оплодотворению.

У интактных самок пиленгаса (контроль) за 5 сут развитие процесса созревания ооцитов не отмечено. У самок, стимулированных гомогенатом гипофиза сазана, диаметр ооцитов увеличился на 25-35 мкм.

Таким образом, при стимуляции самок пиленгаса нейролептиком "Н-И" дозой 2-4 мг/кг и сурфагоном дозой 75 мкг/кг, несмотря на падение содержания растворенного кислорода в воде и температуры после завершения стимуляции, впервые получена 100 %-ная овуляция. Следовательно, в период нерестового сезона этот метод стимуляции эффективен даже при снижении содержания кислорода в воде и температуры, но не ниже пороговых значений, необходимых для успешного нереста.

Цель эксперимента № 3 - изучение возможности индукции нереста самок пиленгаса другим нейролептиком - сульпиридом в комплексе с сурфагоном. По предварительным данным, сульпирид менее активен, чем "Н-И", поэтому его дозы были увеличены в 2 раза и составили 4 и 8 мг/кг. При стимуляции высокой дозой сульпирида овуляция отмечена у 50 % самок, а в'гонадах оставшихся началась резорбция ооцитов. Овуляция наступала через 46,5-69,0 ч после начала стимуляции, что соответствует результатам эксперимента № 2. При стимуляции низкой дозой сульпирида полная овуляция отмечена у 33 % самок, частична также у 33 %, и в ооцитах остальных особей за 3 сут произошло полное слияние жировых капель. Процент оплодотворения икры в этом эксперименте был ниже, чем в эксперименте № 2, и составил 5-20 %.

Следовательно, действие сульпирида на репродуктивную систему пиленгаса в период нереста подобно действию "Н-И", но более слабо выражено. Кроме того, снижение количества овулирующих самок связано также с завершением нерестового сезона, на что указывает начало полной резорбции ооцитов генерации этого года.

Таким образом, впервые получена 100 %-ная овуляция самок пиленгаса при стимуляции их нейролептиками в комплексе с гонадолиберинами. При этом в ходе стимуляции температура воды должна быть не ниже 19 °С, а диаметр ооцитов в начале стимуляции, по-видимому, не менее 575 мкм.

Наиболее эффективно однократное внутрибрюшинное введение нейролептика "Н-И" дозой 2-4 мг/кг и двукратное внутримышечное введение сурфагона суммарной дозой 75 мкг/кг (I инъекция - 25 мкг/кг и через 24 ч II инъекция - 50 мкг/кг). Разработанная технология получения качественных половых продуктов обладает рядом преимуществ по сравнению с ранее существовавшими (дешевизна, стандартная активность препаратов, их стерильность, сокращение числа инъекций и, следовательно, травматизации производителей, уменьшение сроков от начала стимуляции до овуляции и наступления полной овуляции, возможность предсказания начала овуляции с точностью ±17 ч, действие нейролептиков и гонадолиберинов более целенаправленно) и соответствует физиологии организма по сравнению с действием гипофизов, в которых содержится целый комплекс гормонов, часто обладающих противоположным действием.